Spektrometer Jisim Kromatografi Cecair LC/MS
Spektrometer Jisim Kromatografi Cecair LC/MS
Spektrometer jisim kromatografi cecair (LC/MS) ialah, seperti namanya, peranti yang merupakan gabungan kromatografi cecair (LC) dan spektrometer jisim (MS). LC/MS digunakan dalam pelbagai bidang.
Spektrometer jisim kromatografi gas (GC/MS) ialah alat analisis untuk bahan meruap. Sebagai perbandingan, LC/MS digunakan sebagai instrumen yang boleh digunakan untuk pelbagai jenis bahan, daripada bahan meruap kepada bahan refraktori.
Baru-baru ini, trend dalam analisis kromatografi telah berubah daripada kromatografi gas (GC) kepada kromatografi cecair (LC). Sebabnya ialah untuk bahan meruap, GC boleh digunakan, tetapi dengan bahan refraktori, GC tidak boleh digunakan melainkan beberapa rawatan kimia, seperti derivatisasi, dijalankan untuk menjadikan bahan refraktori tidak menentu. Sebaliknya, dengan LC, derivatisasi tidak diperlukan, dan kawasan sampel sasaran boleh menjadi lebih luas daripada yang digunakan dengan GC. Walau bagaimanapun, dalam kes LC, terdapat beberapa aspek pengesan yang menimbulkan kesukaran, jadi pemilihan mesti dibuat untuk sepadan dengan sampel dan ciri. Tetapi menggunakan MS sebagai pengesan menawarkan potensi untuk fleksibiliti yang lebih besar dan ketepatan pengenalan yang lebih baik. Di samping itu, penampilan antara muka untuk menyambung LC dan MS dengan berkesan, serta peningkatan prestasi telah membawa kepada permintaan yang berkembang pesat untuk LC/MS.
Antara Muka LC/MS
Sejak tahun 1970-an, antara muka untuk LC/MS telah menjadi subjek kajian yang mendalam, dan pelbagai kaedah telah dicadangkan dan dilaksanakan. Antaranya ialah, kaedah tali pinggang, di mana fasa bergerak dari LC dijatuhkan ke tali pinggang, dipanaskan dan kemudian diukur menggunakan kaedah pengionan elektron (EI); kaedah semburan, di mana sampel disembur sebagai aerosol gas dan terion menggunakan kaedah EI; dan kaedah semburan termo. Pada akhir 1980-an, kaedah pengionan tekanan atmosfera (API) muncul, dan telah digunakan secara meluas. Ia adalah antara muka LC/MS standard hari ini. Walaupun LC boleh menggunakan cecair pada tekanan atmosfera sebagai fasa bergerak, MS memerlukan vakum yang tinggi. Antara muka yang berjaya menggabungkan sifat bercanggah ini ialah kaedah "API" kaedah pengionan tekanan atmosfera. Terdapat dua jenis kaedah pengionan untuk API, satu kaedah Pengionan Electrospray (ESI), dan satu lagi kaedah Pengionan Kimia Tekanan Atmosfera (APCI).
1) Kaedah ESI
Ini adalah kaedah pengionan di mana penyelesaian fasa mudah alih dimasukkan ke dalam kapilari dan voltan tinggi dikenakan antara kapilari ini dan elektrod bertentangan.
Ciri kaedah ini ialah tenaga pengionan adalah yang paling kecil di antara kaedah pengionan sedia ada. Akibatnya, ini adalah satu-satunya kaedah pengionan yang boleh mendapatkan maklumat berat molekul bukan sahaja sampel polimer biologi, tetapi juga menyelaraskan sebatian ikatan seperti kompleks koordinasi. Di samping itu, apabila kaedah ini digunakan pada protein, peptida, atau asid nukleik, ia membolehkan pemerhatian sebagai ion multivalen.
Sebagai contoh, apabila sebatian dengan berat molekul 10,000 diperhatikan sebagai ion +10-valens, nilai m/z (nisbah jisim/cas) bagi spektrum jisim yang diperolehi menjadi 1,001. Spektrum ion multivalen boleh diperolehi sebagai spektrum ciri dengan taburan, dan membolehkan pengiraan tepat berat molekul menggunakan komputer.
Spektrum ion multivalen antibodi ESI IgG2b (kira-kira 150,000 MW) dan hasil pengiraan berat molekul
2) Kaedah APCI
Seperti yang boleh disimpulkan daripada nama "pengionan kimia tekanan atmosfera", ini adalah kaedah yang menggunakan pelarut fasa mudah alih untuk mengisi peranan yang sama seperti gas reagen dalam pengionan kimia untuk mengukur ion molekul dengan proton dan ion tambahan dengan pelarut fasa bergerak. tambah. Pengionan dilakukan dengan memasukkan aerosol larutan sampel ke dalam kawasan pelepasan korona. Sampel sasaran adalah sebatian dengan kekutuban yang lebih rendah daripada yang sesuai untuk ESI.
Di samping itu, untuk menjalankan pengionan kimia, kepekatan pelarut fasa bergerak mestilah tinggi, jadi kadar aliran 1 ml atau lebih seminit digunakan.
Contoh analisis menggunakan kaedah APCI ditunjukkan di bawah. Sampel sasaran ialah teh hijau. Teh hijau mempunyai banyak katekin, yang terkenal dengan pelbagai kesan, termasuk kesan antibakteria. Keputusan pengukuran 20μl teh hijau biasa yang disuntik ke dalam LC adalah seperti ditunjukkan di bawah.
Hasil pengukuran jelas menunjukkan bahawa teh hijau mengandungi banyak asid amino, katekin, kafein, dan rutin.
Contoh ukuran APCI-LC/MS teh hijau
(EC:epicatechin, EGC:epigallocatechin, ECg:epicathechingallate, EGCg:epigallocathechingallate)
Seperti yang ditunjukkan oleh ini, LC/MS boleh menganalisis komponen pelbagai sampel daripada polimer biologi kepada teh hijau, dengan mudah dan dengan kepekaan yang tinggi.