CLEM untuk Sains Hayat
Apa itu CLEM
CLEM（Correlative Light and Electron Microscopy）adalah kaedah untuk pemerhatian dan analisis yang berkesan dengan menyepadukan maklumat spesimen yang sama yang diperolehi oleh mikroskop cahaya(LM) dan mikroskop elektron penghantaran(TEM) atau mikroskop elektron pengimbasan(SEM). Kelebihan kedua-duanya boleh digunakan dengan melakukan ini untuk pemerhatian dan analisis.
Sila klik di sini dan semak setiap kaedah CLEM untuk Sains Hayat.
mengilat CLEM / mengisar CLEM
Ini ialah kaedah untuk memerhati medan pandangan yang sama seperti imej LM (imej optik) dengan menggunakan mikroskop elektron pengimbasan dengan mendedahkannya ke permukaan dengan menggilap atau mengisar ion, dsb. Adalah mungkin untuk memerhatikan keseluruhan imej atau pewarnaan pendarfluor imej sel dengan menggunakan LM, dan kemudian perhatikan struktur terperinci di dalam sel menggunakan SEM. Keupayaan pemerhatian yang mudah dan meluas adalah ciri. Penggunaan pemegang pautan khusus memudahkan untuk menjajarkan kedudukan.
Menggilap CLEM / aliran kerja CLEM pengilangan
Sel dibiakkan pada hidangan dengan penanda dan pratetap dan diwarnakan . Selepas pemerhatian LM, sampel penyediaan dilampirkan pada pemegang dan koordinat disahkan. Permukaan cerapan didedahkan dengan penggilap dan pengilangan ion, dan diperhatikan dengan menggunakan SEM.
Contoh aplikasi yang mana teknik ini sesuai
- Pemerhatian struktur di dalam sel
- Pemerhatian bidang pandangan yang luas
- Pemerhatian pelbagai titik
pada cip CLEM
Ini ialah kaedah untuk memerhati spesimen ultra-nipis pada pelekap spesimen yang sama (cip tingkap SiN) dengan menggunakan kedua-dua mikroskop cahaya (LM) dan mikroskop elektron penghantaran (TEM). Oleh kerana tiada proses untuk menyebabkan ubah bentuk spesimen antara pemerhatian oleh LM dan TEM, tindanan yang sangat tepat adalah mungkin. Kaedah ini juga boleh digunakan untuk bidang bahan.
pada aliran kerja CLEM cip
CLEM pada cip adalah untuk meletakkan spesimen bahagian ultra-nipis yang disediakan untuk TEM pada cip tetingkap SiN. Cip tetingkap SiN boleh dilekatkan pada pemegang untuk mikroskop cahaya, dan TEM dengan menggunakan penahan khusus. Dengan menukar penggunaan penahan khusus kepada pemegang LM dan pemegang TEM, pemerhatian LM・TEM boleh dilakukan dengan mudah.
Oleh kerana bahagian yang sama boleh diperhatikan, korelasi yang sangat tepat boleh diperolehi.
Contoh aplikasi yang mana teknik ini sesuai
- Spesimen di mana pendarfluor atau cahaya berselerak khas boleh diperhatikan selepas penyediaan bahagian ultra-nipis
- Spesimen di mana pemerhatian perbezaan fasa boleh dilakukan
- Zarah toner (dengan autofluoresensi), atau polimer kristal, dsb.
selain daripada spesimen biologi
LLP-CLEM
Panorama Tanpa Had (LLP) mempunyai fungsi untuk mengimport imej yang diambil secara luaran, seperti dengan mikroskop cahaya. LLP boleh memadankan kawasan cerapan LLP dengan koordinat spesimen mikroskop elektron penghantaran. Selepas memadankan koordinat setiap imej cerapan, gambar montaj kawasan yang diperhatikan oleh LM, diambil dengan menggunakan TEM. Julat yang luas boleh diperhatikan dengan resolusi tinggi.
Aliran Kerja LLP-CLEM
Sel-sel yang dikultur pada hidangan dengan penanda adalah pra-tetap dan diwarnakan. Selepas pengimejan LM, kawasan sasaran spesimen selepas pasca penetapan dan pemasukan resin dipotong menggunakan penanda sebagai mercu tanda. Bahagian ultra-nipis spesimen disediakan dengan menggunakan ultramikrotome dan diperhatikan dengan menggunakan TEM.
Penjajaran dilakukan dengan menentukan tiga atau lebih titik ciri yang sama antara imej LM yang diambil dan imej TEM bagi imej pembesaran rendah. Tentukan kawasan dan lakukan pengimejan LLP.
Contoh aplikasi yang mana teknik ini sesuai
- Pemerhatian bidang pandangan yang luas
- Mencari sejumlah kecil sel mutan, dsb.
Dalam resin CLEM
Dalam resin CLEM ialah teknik untuk menyediakan bahagian ultra-nipis selepas pewarnaan pendarfluor dan pemasukan resin spesimen, menghidupkan semula pendarfluor, dan memerhati bahagian yang sama dengan menggunakan mikroskop cahaya dan mikroskop elektron (TEM/SEM). Untuk menghidupkan semula pendarfluor, pembangkit pendarfluor (larutan TUK) digunakan. Bahagian yang sama boleh diperhatikan dengan kedua-dua mikroskop cahaya dan elektron, membenarkan superposisi imej mikroskopik optik dan elektron yang sangat tepat.
Dalam aliran kerja CLEM resin
Bahagian ultra-nipis dipasang pada cip tetingkap SiN (untuk TEM) atau wafer Si atau kaca slaid (untuk SEM) yang mempunyai permukaan licin. Pembangkit pendarfluor (larutan TUK) digunakan dan diperhatikan oleh mikroskop cahaya, diikuti oleh mikroskop elektron.
Contoh aplikasi yang mana teknik ini sesuai
- Protein pendarfluor yang pendarfluornya boleh hidup semula dengan penggunaan pendarfluor pembangkit semula dan sel dan tisu kultur di mana pengenalan pewarna pendarfluor adalah mungkin.
- Sampel yang memerlukan penjajaran yang sangat tepat seperti penyetempatan protein dalam organel.
CLEM berbilang warna
Pelbagai pengubahsuaian boleh dilakukan dengan zarah nano silika organik, seperti mencampurkan pewarna pendarfluor atau menambah logam berat. Zarah nano silika organik dengan pewarna pendarfluor dan logam berat dibawa ke dalam sel. Zarah nano silika organik dengan beberapa jenis logam berat boleh dibezakan dengan logam berat yang ditambah melalui pemetaan EDS. Oleh itu, adalah mungkin untuk memerhatikannya dalam pelbagai warna bukan sahaja oleh mikroskop cahaya, tetapi juga oleh mikroskop elektron. Ia juga boleh digunakan sebagai penanda apabila kawasan yang diperhatikan oleh mikroskop pendarfluor diperhatikan oleh mikroskop elektron secara terperinci.
Aliran kerja CLEM berbilang warna
Zarah nano silika organik diubah suai seperti "pendarfluor hijau + zarah emas", dan "pendarfluor merah + zarah besi". Ini diperkenalkan kepada sel kultur dan kemudian pengesahan kawasan yang sama adalah mungkin dengan menggunakan pemerhatian pendarfluor dan pemetaan EDS.
Contoh aplikasi yang mana teknik ini sesuai
- Sel jenis makrofaj memfagositosis zarah nano silika
- Mikroorganisma memakan zarah nano silika seperti paramecium dan amoeba
- Penandaan adalah mungkin untuk sel in vivo melalui suntikan intravena
Pengenalan Produk Berkaitan
Cip Tetingkap SiN
Filem SiN berkekuatan tinggi membolehkan kita memerhatikan kawasan bersiri besar bersaiz milimeter. Ia juga sesuai untuk pemerhatian bahagian yang dihiris secara bersiri kerana tiada kawasan yang tidak kelihatan yang disebabkan oleh grid TEM konvensional. Penahan khusus memudahkan untuk melakukan Correlative Light and Electron Microscopy (CLEM).
Klik butang di bawah untuk kembali ke halaman TOP Biologi / Sains Hayat