Analisis oligonukleotida menggunakan JMS-S3000 "SpiralTOF™-plus 2.0"
MSTips No. 364
Pengenalan
Nukleotida ialah sebatian di mana kumpulan fosfat terikat kepada nukleosida yang terdiri daripada bes dan gula dan merupakan blok binaan asid deoksiribonukleik (DNA) dan asid ribonukleik (RNA). Ubat asid nukleik menarik perhatian sebagai agen terapeutik untuk penyakit yang sukar dirawat, dan sehingga Oktober 2022, 16 ubat asid nukleik telah diluluskan di Jepun, Amerika Syarikat atau EU1). Dalam beberapa tahun kebelakangan ini, oligonukleotida yang disintesis telah digunakan sebagai ubat asid nukleik. Pengesahan berat molekul oligonukleotida tersintesis adalah penting untuk kawalan kualiti farmaseutikal. Dalam laporan ini, kami menggunakan oligonukleotida yang disintesis (Jadual 1) sebagai sampel dan mengukurnya dengan MALDI-TOFMS.
Jadual 1) Urutan asas oligonukleotida tersintesis dan m/z nilai.
| Urutan | Terendah m/z nilai [M+H]+ | sederhana m/z nilai [M+H]+ |
|---|---|---|
| 5'-CGCTAAGTACGCAATGGGCC-3' | 6125.0710 | 6127.9928 |
Syarat pengukuran
Matriks 3-HPA (asid 3-Hydroxypicolinic) telah disediakan kepada 20 mg/mL 50% AcN (larutan akueus diammonium sitrat 20 mM). Larutan akueus 50 μM oligonukleotida yang disintesis digunakan sebagai sampel. Selepas mencampurkan larutan matriks dan larutan sampel pada 5:1 (v/v), ia dikesan pada plat sasaran, dikeringkan di udara, dan diukur dalam mod Linear TOF (mod ion positif) dan mod SpiralTOF (mod ion positif) .
Keputusan dan ringkasan
Rajah 1 menunjukkan hasil pengukuran dalam mod Pelapik dan Lingkaran TOF. Dalam kedua-dua mod, molekul terprotonasi oligonukleotida diperhatikan sebagai puncak yang paling sengit, dan penambahan ion natrium juga diperhatikan. Dalam mod Linear TOF, sukar untuk menyelesaikan puncak isotop kerana resolusi jisim yang rendah, tetapi dalam mod SpiralTOF, resolusi jisim kira-kira 40,000 diperolehi, dan corak isotop diperhatikan dengan jelas. Membandingkan corak isotop simulasi (Rajah 2a) dan spektrum jisim yang diukur (Rajah 2b), corak puncak isotop dipersetujui dengan baik. Ralat jisim puncak monoisotopik telah disahkan -6.4 mDa (-1.0 ppm) dengan kaedah piawai luaran.
Seperti yang diterangkan di atas, JMS-S3000 "SpiralTOF™-plus 2.0" telah ditunjukkan sebagai alat analisis yang sangat berkesan untuk analisis asid nukleik.
Rajah 1 Spektrum jisim mod LinearTOF(b) dan mod SpiralTOF(a) .
Rajah 2 Perbandingan corak isotop teori (a) dan corak isotop [M+H] yang diperolehi+(B).
Rujukan
1) Laman web pembahagian sasaran molekul dan produk terapi gen, institut sains kesihatan kebangsaan, Jepun
(https://www.nihs.go.jp/mtgt/pdf/section2-1.pdf)
Pengakuan
Contoh ihsan Prof. Masumi Taki, Universiti Elektro-Komunikasi
Rumusan berdasarkan bidang
Lebih Banyak Produk
Kategori produk
Adakah anda seorang profesional perubatan atau kakitangan yang terlibat dalam penjagaan perubatan?
Tidak
Sila diingatkan bahawa halaman ini tidak bertujuan untuk memberikan maklumat tentang produk kepada orang ramai.