Analisis Peptida menggunakan Field Desorption (FD) JMS-T2000GC AccuTOF™ GC-Alpha

Pengenalan

Field Desorption (FD) ialah kaedah pengionan yang menggunakan kesan terowong dalam medan elektrik tinggi yang dijana antara pemancar yang disalut dengan sampel dan elektrod yang dikenakan voltan tinggi. Ia dikenali sebagai kaedah pengionan lembut yang hanya memberikan maklumat berat molekul kerana tenaga dalaman yang diberikan kepada sampel semasa pengionan adalah rendah dan pemecahan tidak mungkin berlaku. Dalam pengukuran FD, pemancar bersalut sampel diperkenalkan terus ke sumber ion menggunakan probe khusus. Oleh itu, adalah mungkin untuk mengukur sebatian sukar meruap, sebatian polar, sebatian tidak stabil secara haba, dsb., yang sukar diukur dengan GC-MS. Gabungan FD dan spektrometer jisim masa penerbangan (TOFMS) membolehkan pengiraan formula molekul bagi sebatian yang diukur. Gambaran keseluruhan FD dan teknik pensampelan dalam spektrometer jisim masa penerbangan kromatografi gas JMS-T2000GC AccuTOF™ GC-Alpha diterangkan dalam MSTips No. 355 dan MSTips No. 403.
Dalam MSTips ini, kami melaporkan hasil analisis peptida angiotensin I menggunakan FD JMS-T2000GC sebagai contoh analisis sebatian yang sangat kutub.

Eksperimen

Angiotensin I yang boleh didapati secara komersial hidrat garam asetat manusia digunakan sebagai sampel (Rajah 1). Angiotensin I disediakan kepada 10 mg/mL menggunakan campuran 0.1% TCA:methanol (1:1). Kemudian, 1 μL setiap sampel ini dan 1 mg/mL larutan metanol kuprum(II) phthalocyanine (jenis-α) (digunakan sebagai pembetulan hanyut jisim) digunakan pada pemancar untuk pengukuran. Spektrometer jisim masa penerbangan kromatografi gas JMS-T2000GC AccuTOF™ GC-Alpha telah digunakan untuk pengukuran. Sumber ion gabungan EI/FI/FD telah digunakan, dan FD digunakan sebagai kaedah pengionan. Keadaan pengukuran terperinci lain ditunjukkan dalam Jadual 1.

Rajah 1 Formula struktur angiotensin I

Jadual 1 Keadaan pengukuran

syarat MS
spektrometer	JMS-T2000GC AccuTOF™ GC-Alpha (JEOL Ltd.)
Sumber Ion	Sumber ion gabungan EI/FI/FD
Pengionan	FD+ (Voltan Katod: -10 kV, Arus Pemancar: 0 mA → 51.2 mA/min →50 mA)
Julat Jisim	m/z 50 - 1,600

Hasil

Rajah 2 menunjukkan TICC untuk pengukuran ini. Dua puncak dikesan; puncak kiri diperolehi daripada angiotensin I, dan puncak kanan diperolehi daripada phthalocyanine kuprum.     

Rajah 2 Jumlah kromatogram arus ion

Rajah 3 menunjukkan spektrum jisim yang dicipta daripada puncak angiotensin I. [M+H]⁺, [M+2J]²⁺, [M+3J]³⁺ angiotensin I telah dikesan (Rajah 3). Jadual 2 menunjukkan komposisi unsur anggaran hasil puncak ini. Ralat jisim dikira berada dalam -1.5 mDa, yang merupakan nilai yang baik. Tambahan pula, corak isotop [M+H]⁺ adalah lebih kurang sama dengan hasil simulasi (Rajah 4), menunjukkan bahawa keputusan pengukuran yang baik telah diperolehi. Pada asasnya, peptida tidak boleh diukur menggunakan GC-MS kerana kekutubannya yang tinggi. Tetapi FD yang merupakan kaedah MS langsung boleh digunakan untuk analisis peptida, maka formula molekul peptida boleh dikira dengan mudah menggunakan sistem FD-TOFMS. 

Rajah 3 Spektrum jisim angiotensin I

Rajah 4 Hasil simulasi corak isotop [M+H]⁺

kesimpulan

Dalam MSTips ini, kami memperkenalkan keputusan analisis angiotensin I sebagai contoh analisis sebatian sangat kutub menggunakan FD. Hasil daripada analisis, telah disahkan bahawa molekul terproton yang berkaitan dengan berat molekul boleh diperhatikan, dan tambahan pula, jisim yang tepat boleh diperolehi dengan ketepatan yang baik. Keputusan ini menunjukkan bahawa FD boleh digunakan untuk menganalisis sebatian sangat polar yang sukar diukur oleh GC-MS.

Rumusan berdasarkan bidang

Kimia

Makanan/Tumbuhan

Biologi / Sains hayat

Lebih Banyak Produk

JMS-T2000GC AccuTOF™ GC-Alpha Kromatografi Gas Berprestasi Tinggi - Spektrometer Jisim Masa-Penerbangan