Analisis Kepekaan Tinggi Protein utuh Menggunakan TOF Linear

Pengenalan

JMS-S3000 SpiralTOF^TM mempunyai laluan penerbangan unik sepanjang 17m yang menawarkan sistem MALDI-TOFMS resolusi tertinggi yang tersedia pada masa ini. Walau bagaimanapun, ion dengan jangka hayat yang sangat singkat atau yang mengalami pemisahan spontan semasa penerbangannya tidak dapat dikesan oleh SpiralTOF (atau TOF pantulan konvensional). Untuk menangani situasi ini, pilihan SpiralTOF dengan TOF Linear boleh digunakan untuk analisis sensitiviti tinggi protein utuh.

Dalam kerja ini, kami menunjukkan pengukuran protein utuh dengan menggunakan pilihan Linear TOF untuk sistem JEOL SpiralTOF.

Eksperimen

Piawaian protein diperolehi daripada Sigma-Aldrich.

• Pepsin (mukosa gastrik babi), P-6887

• Albumin (serum lembu), A8471

• Conalbumin (putih telur ayam), C0755

• IgG (serum lembu), I5506

Sampel standard protein telah dilarutkan dalam air pada kepekatan 1 pmol/μL. Asid sinapinik (SA) digunakan sebagai matriks dan telah dilarutkan dalam air 1:1 / asetonitril yang mengandungi 0.1% asid trifluoroasettik. Seterusnya, larutan piawai protein dan larutan SA dicampurkan bersama 1:1 mengikut isipadu. Selepas itu, 0.5μL campuran ini diletakkan pada plat sasaran MALDI (250 fmol/spot). Akhir sekali, sampel kering diukur menggunakan pilihan Linear TOF yang terdapat pada JMS-S3000 SpiralTOF^TM sistem MS.

Rajah 1. SpiralTOF dengan pilihan TOF Linear

Rajah 2. Spektrum jisim piawai protein MALDI, (a) Pepsin (250 fmol/spot),
(b) Albumin (250 fmol/spot) (c) Conalbumin (250 fmol/spot), (d) IgG (250 fmol/spot).

Keputusan & perbincangan

Spektrum jisim MALDI ditunjukkan dalam Rajah 2 untuk setiap sampel protein. Puncak yang sepadan dengan molekul terprotonasi cas tunggal dan dua kali diperhatikan pada jangkaan m/z nilai untuk struktur utama protein ini.

Pilihan SpiralTOF dengan TOF Linear disediakan

• Bentuk puncak yang baik dalam tinggi m/z rantau

• Nisbah isyarat kepada hingar yang sangat baik untuk sampel ini pada kepekatan ini (250 fmol)

Spektrum jisim berkualiti tinggi telah dicapai untuk protein utuh dengan menggunakan sistem JEOL JMS-S3000. Juga perlu diperhatikan, TOF Linear boleh mengukur molekul utuh sehingga m/z 500,000 (data tidak ditunjukkan dalam contoh ini).

Rumusan berdasarkan bidang

Biologi / Sains hayat

Makanan/Tumbuhan

Perubatan

Kimia

Lebih Banyak Produk

JMS-S3000 SpiralTOF™-plus 3.0Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-FlightMass Spectrometer

Kategori produk

MALDI-TOF MS