Dalam resin CLEM dengan penyelesaian pemulihan pendarfluor

Baru-baru ini, pelbagai fenomena fisiologi dan penyetempatan bahan biologi telah diperhatikan dengan mikroskop optik dengan menggunakan pewarna pendarfluor dan protein pendarfluor. CLEM ialah kaedah memerhati sampel yang sama dengan mikroskop optik dan mikroskop elektron, dan menggabungkan imej pemerhatian ini untuk menyepadukan maklumat yang diperolehi oleh setiap instrumen. Oleh itu, penjajaran ketepatan yang tinggi diperlukan untuk penggabungan imej ini. Walau bagaimanapun, pendarfluor pewarna dan protein pendarfluor yang diperhatikan dengan mikroskop optik adalah pelindapkejutan melalui penyediaan sampel untuk pemerhatian mikroskop elektron (penetapan, dehidrasi, pemasukan resin, dan lain-lain), Pemerhatian mikroskop optik dan pemerhatian mikroskop elektron terpaksa dilakukan dalam keadaan yang berbeza. CLEM-Merah^*1 ialah protein pendarfluor yang memulihkan pendarfluor melalui rawatan dengan penyelesaian pendarfluor pulih (larutan TUK^*2) walaupun selepas penetapan dengan glutaraldehid atau osmium tetroksida, dan pendarfluor ini kekal walaupun selepas dibenamkan dalam resin. Dengan menggunakan CLEM-Red dan penyelesaian pemulihan pendarfluor, kita boleh memerhati bahagian ultra-nipis selepas pembenaman resin dengan mikroskop pendarfluor, yang membolehkan CLEM yang sangat tepat.

Protokol

^{* 1,2} Penyelesaian CLEM-Red, TUK ialah produk Fujifilm Wako Pure Chemical Corporation.

Hasil

Fenomena degradasi untuk organel dan protein yang tidak diperlukan dalam sel dipanggil autophagy. Dalam autophagy ini, autophagosome yang merupakan struktur membran mengelilingi bahan yang tidak diperlukan diperhatikan. Telah dicadangkan bahawa protein p62 memainkan peranan penting dalam pembentukan autofagosom ini. Sel HeLa yang mengekspresikan protein gabungan p62 dan CLEM-Red telah diperhatikan dalam Resin CLEM.
Hasil daripada pemerhatian ini, protein gabungan CLEM-red-p62 telah disetempatkan dalam struktur titisan minyak sel, dan autofagosom terbentuk di kawasan bersebelahan.

Sampel: Sel Hela, pCLEM-Red-p62
Mikroskop konfokal: A1 (Nikon)
Mengimbas mikroskop elektron: JSM-7900F (JEOL)

Peruntukan sampel
Dr. Isei Tanida, Prof. Yasuo Uchiyama (universiti Junendo, Tokyo)

Rujukan

Tanida I, Haruta T, Suga M, Takei S, Takebe A, Furuta Y, Yamaguchi J, Oliva
Trejo JA, Kakuta S, Uchiyama Y. Struktur Membran Terus Hubungi
Dengan Badan p62/SQSTM1.
J Histochem Cytochem. 2021 Jun; 69 (6) : 407-414.